原理
瓊脂糖凝膠ag真人是用瓊脂糖作支持介質的一種ag真人方法。其分析原理與其他支持物ag真人最主要區別是:它兼有“分子篩”和“ag真人”的雙重作用.
一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠ag真人就可以;如果需要分辨率高的ag真人,特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯酰胺凝膠ag真人;用普通ag真人不合適的巨大DNA鏈應該使用脈沖凝膠ag真人。注意巨大的DNA鏈用普通ag真人可能跑不出膠孔導致缺帶。
瓊脂糖凝膠ag真人是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質的一種ag真人方法。對于分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行ag真人分離。這是我做病毒檢測實驗試劑盒的說明書部分,看是否對你有幫助:
配制1%的膠進行ag真人
1 稱取0.4g瓊脂糖放于錐形瓶中,再量取40ml的0.5×TBE溶液混合,放于微波爐中煮沸,至溶液清徹透明為止,大約需1分40秒。
2 冷卻到60℃時(放于掌心,能感覺到湯但又能忍受。)加2μl核酸染料,搖勻。
3 組裝好制膠器,并調至水平。將膠倒于制膠器中,插好梳子。待40分鐘膠冷卻凝固后,就可放于倒好ag真人緩沖液的ag真人槽中進行點樣。
4 取5-10μl樣品溶液,加1-2μl 6×loading Dye,混合均勻后進行點樣。每排點樣孔要點一個5μl的Marker。
5 點完后,調ag真人儀各參數進行ag真人:U:80V;A;200A;T:40min。
ag真人加工結束,凝膠成像系統觀察結果。
做實驗需要注意的一點就是要戴手套操作,保護好自己。像如果用的核酸染料是EB、緩沖液是TAE的話,就要更加小心了,那玩意兒致癌性比較強;像ag真人游戏官方用的是GoldViewTM 核酸染料和TAE還不是特別要緊。
還有就是,這里說的40ml制的一般都是25孔的中膠,你要根據所需要的孔數來按比例調節用量。膠不能制的太厚或者太薄,二者都不利于ag真人的。
煮膠的時候,一定要讓膠完全溶解(拿起來對著光照看,沒有亮亮的小點出現),不然跑出來的膠不好看;煮的時間也不能太長,煮久了對樣品的回收這類的可能有影響的。